Resumen

 

Efectos de distintas concentraciones de aditivos y condiciones de procesamiento en la germinación y crecimiento de esporas de Clostridium difficile in vitro y en un modelo cárnico 

Estudiante: Marcy Isabel González Vargas

Efectos de distintas concentraciones de aditivos y condiciones de procesamiento en la germinación y crecimiento de esporas de Clostridium difficile in vitro y en un modelo cárnico RESUMEN Clostridiodes difficile es uno de los principales agentes infecciosos causantes de la diarrea nosocomial, la cual se asocia con altas tasas de morbilidad y mortalidad, además de altos costos en atención médica. Las esporas son la forma infectante de C. difficile y se transmiten por medio de la ruta fecal-oral. Diversos estudios en América del Norte y otras partes del mundo (incluyendo Costa Rica) han demostrado niveles importantes de contaminación de carne cruda con esta bacteria. Lo anterior podría representar un riesgo de contagio para el consumidor a nivel comunitario.  Una problemática en los estudios de prevalencia son las diferentes técnicas utilizadas para el aislamiento de C. difficile y ningún estudio se ha dado a la tarea de realizar una evaluación sistemática de los factores que pueden afectar el crecimiento de este microorganismo en los medios de enriquecimiento. En este estudio se optimizó la concentración de taurocolato el cual es el componente más importante en la germinación de la espora de esta bacteria y cuya respuesta puede estar relacionada con la cepa involucrada.  La dosis infectante de este microorganismo sigue siendo desconocida y su prevalencia es cada vez mayor y, tomando en cuenta que la ruta de infección es fecal- oral, este estudio determinó la capacidad de este microorganismo de crecer en un alimento procesado de origen cárnico, en el cual se utiliza materias primas que contienen este microorganismo.  Para todos los estudios se utilizaron 3 cepas aisladas en Costa Rica de muestras clínicas y una cepa de referencia lo que permitió determinar si hay diferencias en su capacidad de germinar y crecer en cada una de las condiciones que se evaluaron en este trabajo. Las condiciones utilizadas fueron aquellas propias de los procesos productivos de embutidos a nivel nacional y de esta forma se pudo tener un panorama más claro de si esta bacteria podría ser un riesgo en productos de origen cárnico.  Entre los principales resultados, al optimizar la cantidad de taurocolato y temperatura de activación para las cepas C30 y NAP7/RT078, se encontró que el modelo es significativo, para NAP1/RT027 el modelo no lo fue y para el VP1 10463 sí se presenta un modelo significativo y presenta significancia en los efectos cuadráticos por lo que el valor predicho de 0,7182 se puede alcanzar con varias combinaciones dentro del modelo.  Al analizar el efecto de la adición de nitrito, sal, eritorbato y lactato, la combinación de los cuatro ingredientes cárnicos resultó en una inhibición significativa del crecimiento y para el caso del efecto de los ingredientes individuales, se reportó inhibición significativa para nitrito, lactato y sal en el caso de todas las cepas a excepción del aislado de referencia VPI/104693; para esta cepa de referencia se encontró una inhibición significativa solo en el caso del lactato.  Al analizar efecto del tiempo de congelación previo en el crecimiento de esporas de C. difficile se observa que las cepas de los genotipos NAP1/RT027, NAP7/RT078 y C30 no presentan diferencia significativa en los diferentes tiempos de congelación y para el caso de la cepa de referencia VPI 10463 no se encontró un resultado lógico. En lo que respecta al tiempo de prerreducción del medio en el crecimiento de esporas de C. difficile todas las cepas crecieron aun cuando el medio no estaba prereducido (0 horas) y no se encontró diferencia significativa para los tiempos de 0 y 3 horas para ninguna de las cepas con excepción de la C30.  Por último, se realizó un modelo secundario con la cepa del genotipo NAP1/RT027 con las tasas de crecimiento a diferentes concentraciones de nitritos se obtuvo una ecuación polinómica de segundo orden que mejor tuvo el ajuste y donde se puede observar una relación directamente proporcional (p < 0,05) entre la tasa de crecimiento y la concentración de nitrito (ppm).  Todos los resultados indican que C. difficile es una bacteria que, no solo puede ser un patógeno de origen alimentario, sino que resiste condiciones típicas de la industria de cárnicos listos para consumir. 

Resumen

Estudio de asociación entre el gen candidato DISC1 y la psicosis en la población del Valle

Central de Costa Rica

Esteban José Rodríguez Rodríguez

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Disrupted in Schizophrenia 1 (DISC1) es un gen originalmente identificado como afectado por

una translocación cromosómica en miembros de una familia escocesa con una alta prevalencia

de trastornos psiquiátricos. La translocación se reportó asociada a la presencia de trastornos

psiquiátricos en la familia y desde entonces múltiples estudios se han realizado en otras

poblaciones para buscar asociación entre este tipo de padecimientos y el gen, así como diversos

estudios celulares y moleculares para tratar de entender los mecanismos en los que participa.

Desde un enfoque genético, múltiples variantes se han reportado asociadas para DISC1 en

diferentes poblaciones, aunque pocas se han repetido entre estudios. En contraparte, los

análisis moleculares concuerdan en la participación de la proteína dentro de vías

neurológicamente relevantes y el uso de modelos en líneas celulares y ratones ha mostrado que

la afectación de la proteína genera déficit en el neurodesarrollo, procesos neurodegenerativos

y fenotipos tipo trastornos psiquiátricos. En este estudio se realizó un llamado de variantes para

la secuencia completa del gen, en genomas de 114 personas pertenecientes a una familia

multigeneracional costarricense con alta prevalencia de trastornos psiquiátricos para detectar

evidencias de asociación entre las variantes del gen y el fenotipo de psicosis en Costa Rica.

Además, se utilizó un enfoque de biología de sistemas para profundizar en los roles moleculares

de regulación transcripcional que DISC1 ejerce sobre la transcripción de PDE4 al formar un

complejo regulador con ATF4, esto para identificar los puntos de mayor control en la vía que

permitan regular la expresión de DISC1 y de PDE4. Como resultados se encontraron 10 variantes

con valores nominales de significancia (sin corrección) asociadas a psicosis, nueve de ellas

dentro de la misma región del gen (el intrón 9-10) siendo rs5781671 la más asociada con un

valor nominal p = 0,0088. Además, se logró identificar a miR-Let-7a2 como potencial punto de

control para la expresión de DISC1 y a miR103-a2 y CREB1-TF como potenciales puntos de

control para regular la expresión de PDE4D identificándolos como posibles blancos terapéuticos

in silico para promover procesos neuroprotectores.

 

Resumen

"Evaluación de la utilidad como biomarcador del ADN circulante tumoral para el monitoreo de los estadios clínicos y funcionales en pacientes con cáncer de mama"

Ricardo Chinchilla Monge

Título:  Resumen: El cáncer comprende un conjunto de enfermedades con alta incidencia y mortalidad. En Costa Rica el cáncer de mama es el segundo más frecuente en las mujeres y el primero en mortalidad. Sin embargo, las estrategias de tamizaje y monitoreo de la terapia cont ra el cáncer presentan limitaciones que impiden conseguir una mayor sensibilidad y especificidad, y por ende un mayor impacto. La determinación de ADN circulante (ADNc) se basa en la cuantificación del ADN fragmentado que se encuentra libre en la sangre to tal de las personas. En presencia de un cáncer, la liberación de ADN circulante aumenta debido principalmente a dos razones: 1) en el tumor no se realizan adecuadamente los procesos de clarificación del ADN por parte de los fagocitos; 2) se dan una mayor c antidad de procesos necróticos y apoptóticos que conllevan a mayor liberación de ADN tumoral. La utilización de metodologías específicas que permitan cuantificar las variantes de nucleótido simple (SNVs) como un biomarcador relacionado con la dinámica de c recimiento y evolución tumoral permite monitorear el tratamiento de la enfermedad y evaluar la enfermedad mínima residual, la progresión y pronóstico en pacientes de diagnóstico inicial como en pacientes metastásicos. En este trabajo se evaluó la factibili dad de realizar la determinación en ADN circulante tumoral (ADNct) de mutaciones en genes específicos relacionados con el cáncer de mama y correlacionar estas con la progresión de la enfermedad. También, se evaluó la correlación entre la respuesta al trata miento y los niveles de ADNct en plasma de pacientes de acuerdo a los estadios clínicos y funcionales. el estudio comparó la posible relación entre la supervivencia Finalmente, libre de progresión, supervivencia global y los niveles de ADNc de las paciente El estudio s. reveló que la determinación en muestras seriadas (del mismo paciente) de SNVs en los genes ESR1 y PIK3CA permite monitorear la evolución de la enfermedad. El seguimiento en las muestras seriadas evidenció cambios en la dinámica evolutiva del tumor (i.e. surgimiento de subclonas) a partir del aumento en la frecuencia alélica de ciertos SNVs con respecto a otros. El estudio también reveló que la respuesta al tratamiento y la concentración de ADNc correlaciona con el beneficio clínico en la super vivencia global de las pacientes de cáncer de mama, pese a ser un grupo histológicamente heterogéneo. A partir de este proyecto, se concluye que el ADNc es útil como biomarcador para determinar la  supervivencia global de las pacientes y permite evidencia r cambios en la dinámica del tumor que se asocian con los estadios clínicos y funcionales de las pacientes con cáncer de mama metastásico.

Resumen

"Evaluación de la utilidad como biomarcador del ADN circulante tumoral para el monitoreo de los estadios clínicos y funcionales en pacientes con cáncer de mama"

Ricardo Chinchilla Monge

Título:  Resumen: El cáncer comprende un conjunto de enfermedades con alta incidencia y mortalidad. En Costa Rica el cáncer de mama es el segundo más frecuente en las mujeres y el primero en mortalidad. Sin embargo, las estrategias de tamizaje y monitoreo de la terapia cont ra el cáncer presentan limitaciones que impiden conseguir una mayor sensibilidad y especificidad, y por ende un mayor impacto. La determinación de ADN circulante (ADNc) se basa en la cuantificación del ADN fragmentado que se encuentra libre en la sangre to tal de las personas. En presencia de un cáncer, la liberación de ADN circulante aumenta debido principalmente a dos razones: 1) en el tumor no se realizan adecuadamente los procesos de clarificación del ADN por parte de los fagocitos; 2) se dan una mayor c antidad de procesos necróticos y apoptóticos que conllevan a mayor liberación de ADN tumoral. La utilización de metodologías específicas que permitan cuantificar las variantes de nucleótido simple (SNVs) como un biomarcador relacionado con la dinámica de c recimiento y evolución tumoral permite monitorear el tratamiento de la enfermedad y evaluar la enfermedad mínima residual, la progresión y pronóstico en pacientes de diagnóstico inicial como en pacientes metastásicos. En este trabajo se evaluó la factibili dad de realizar la determinación en ADN circulante tumoral (ADNct) de mutaciones en genes específicos relacionados con el cáncer de mama y correlacionar estas con la progresión de la enfermedad. También, se evaluó la correlación entre la respuesta al trata miento y los niveles de ADNct en plasma de pacientes de acuerdo a los estadios clínicos y funcionales. el estudio comparó la posible relación entre la supervivencia Finalmente, libre de progresión, supervivencia global y los niveles de ADNc de las paciente El estudio s. reveló que la determinación en muestras seriadas (del mismo paciente) de SNVs en los genes ESR1 y PIK3CA permite monitorear la evolución de la enfermedad. El seguimiento en las muestras seriadas evidenció cambios en la dinámica evolutiva del tumor (i.e. surgimiento de subclonas) a partir del aumento en la frecuencia alélica de ciertos SNVs con respecto a otros. El estudio también reveló que la respuesta al tratamiento y la concentración de ADNc correlaciona con el beneficio clínico en la super vivencia global de las pacientes de cáncer de mama, pese a ser un grupo histológicamente heterogéneo. A partir de este proyecto, se concluye que el ADNc es útil como biomarcador para determinar la  supervivencia global de las pacientes y permite evidencia r cambios en la dinámica del tumor que se asocian con los estadios clínicos y funcionales de las pacientes con cáncer de mama metastásico.